检测生活污水中甲基汞和乙基汞的步骤
2022-10-15 16:06:11 admin
在自然环境中汞会以各种形势而存在，并且非常异变。例如环境中汞化合物会被微生物转换成甲基汞。这种甲基与汞的有机化合物不易分解，会在生物体内累积。水中的甲基汞和乙基汞可以用液相色谱-原子荧光光谱法进行测定。
其原理是用已活化的C18固相萃取柱对水中的甲基汞和乙基汞进行富集，用流动相将已富集的甲基汞和乙基汞洗脱至较小体积的溶液中。洗脱液通过液相色谱，将甲基汞和乙基汞依次分离，与氧化剂混合，在紫外光的照射下先后被氧化为无机汞，最后混合还原剂和盐酸发生氢化反应，用原子荧光光谱仪进行测定。
2. 乙酸铉：分析纯。
3. 氢氧化钠：分析纯。
4. L-半胱氨酸：生化试剂，纯度≥99.0%。
5.二乙基二硫代氨基甲酸纳:分析纯。
6. 氢氧化钾：分析纯。
7. 盐酸：分析纯。
8. 过硫酸钾：分析纯。
9. 硼氢化钾：分析纯。
10. 甲基汞标准储备液100ug/mL：市售以甲醇为溶剂的有证标准溶液，开封后于-20℃冷冻保存，避光、密封可保存12个月。
11. 乙基汞标准储备液100ug/mL：市售以甲醇为溶剂的有证标准溶液，开封后于-20℃冷冻保存，避光、密封可保存12个月。
12. 甲醇溶液:用甲醇与实验用水按照1:9的体积比进行混合，制得体积分数为10%的甲醇溶液。
13. DDTC溶液：称取0.1g二乙基二硫代氨基甲酸纳溶解于100g实验用水中，制得质量分数为0.1%的DDTC改性溶液，用于固相萃取柱的活化。
14. 乙酸铉60mmoL、半胱氨酸10mmoL、体积分数5%的甲醇混合溶液：量取体积分数为10%的甲醇溶液500mL,乙酸铉4.62g,L-半胱氨酸1.21g,用实验用水定容至1000mL,经溶剂过滤器过微孔滤膜抽滤，并超声30min以上，用作液相色谱的流动相。
15. 盐酸溶液：量取70mL浓盐酸，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得体积分数7%的盐酸溶液，用作载流溶液。
16. 氢氧化钾-硼氢化钾溶液:
称取3.5g氢氧化钾,0.2g硼氢化钾，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得氢氧化钾、硼氢化钾混合溶液，用作还原剂，当日配制使用。
17. 过硫酸钾-氢氧化钾溶液：
称取1.0g过硫酸钾和3.5g氢氧化钾，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得过硫酸钾、氢氧化钾混合溶液，用作氧化剂，当日配制使用。
18. 甲基汞和乙基汞混合标准中间液：
分别准确移取1.00mL的甲基汞和乙基汞标准储备液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合标准中间液。
19. 甲基汞和乙基汞混合标准使用液1：
准确移取5.00mL浓度为1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合标准中间液于50mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞的混合标准中间液。再准确移取5.00mL上述浓度为100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合的标准中间液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为5.0ug/mL甲基汞和乙基汞混合标准使用液。
20. 甲基汞和乙基汞混合标准使用液2：
准确移取5.G0mL浓度为1000.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合标准中间液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为50.0ug/mL甲基汞和乙基汞合标准使用液。
2. 微孔滤膜:0.45um 水系/有机系混合滤膜。
3. 固相萃取装置：手动、自动均可。
4. 液相色谱-原子荧光联用仪。
5. 微量进样针：100 uL。
6. 分析天平：感量0. 0001g。
以上内容来源于《DB65/T 4367-2021 水质 甲基汞和乙基汞的测定 液相色谱-原子荧光光谱法》
其原理是用已活化的C18固相萃取柱对水中的甲基汞和乙基汞进行富集，用流动相将已富集的甲基汞和乙基汞洗脱至较小体积的溶液中。洗脱液通过液相色谱，将甲基汞和乙基汞依次分离，与氧化剂混合，在紫外光的照射下先后被氧化为无机汞，最后混合还原剂和盐酸发生氢化反应，用原子荧光光谱仪进行测定。
检测所需试剂
1. 实验室一级纯水2. 乙酸铉：分析纯。
3. 氢氧化钠：分析纯。
4. L-半胱氨酸：生化试剂，纯度≥99.0%。
5.二乙基二硫代氨基甲酸纳:分析纯。
6. 氢氧化钾：分析纯。
7. 盐酸：分析纯。
8. 过硫酸钾：分析纯。
9. 硼氢化钾：分析纯。
10. 甲基汞标准储备液100ug/mL：市售以甲醇为溶剂的有证标准溶液，开封后于-20℃冷冻保存，避光、密封可保存12个月。
11. 乙基汞标准储备液100ug/mL：市售以甲醇为溶剂的有证标准溶液，开封后于-20℃冷冻保存，避光、密封可保存12个月。
12. 甲醇溶液:用甲醇与实验用水按照1:9的体积比进行混合，制得体积分数为10%的甲醇溶液。
13. DDTC溶液：称取0.1g二乙基二硫代氨基甲酸纳溶解于100g实验用水中，制得质量分数为0.1%的DDTC改性溶液，用于固相萃取柱的活化。
14. 乙酸铉60mmoL、半胱氨酸10mmoL、体积分数5%的甲醇混合溶液：量取体积分数为10%的甲醇溶液500mL,乙酸铉4.62g,L-半胱氨酸1.21g,用实验用水定容至1000mL,经溶剂过滤器过微孔滤膜抽滤，并超声30min以上，用作液相色谱的流动相。
15. 盐酸溶液：量取70mL浓盐酸，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得体积分数7%的盐酸溶液，用作载流溶液。
16. 氢氧化钾-硼氢化钾溶液:
称取3.5g氢氧化钾,0.2g硼氢化钾，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得氢氧化钾、硼氢化钾混合溶液，用作还原剂，当日配制使用。
17. 过硫酸钾-氢氧化钾溶液：
称取1.0g过硫酸钾和3.5g氢氧化钾，溶于实验用水并稀释至1000mL,制得过硫酸钾、氢氧化钾混合溶液，用作氧化剂，当日配制使用。
18. 甲基汞和乙基汞混合标准中间液：
分别准确移取1.00mL的甲基汞和乙基汞标准储备液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合标准中间液。
19. 甲基汞和乙基汞混合标准使用液1：
准确移取5.00mL浓度为1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合标准中间液于50mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞的混合标准中间液。再准确移取5.00mL上述浓度为100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合的标准中间液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为5.0ug/mL甲基汞和乙基汞混合标准使用液。
20. 甲基汞和乙基汞混合标准使用液2：
准确移取5.G0mL浓度为1000.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合标准中间液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，得到浓度为50.0ug/mL甲基汞和乙基汞合标准使用液。
检测所需材料及设备
1. C18固相萃取柱。2. 微孔滤膜:0.45um 水系/有机系混合滤膜。
3. 固相萃取装置：手动、自动均可。
4. 液相色谱-原子荧光联用仪。
5. 微量进样针：100 uL。
6. 分析天平：感量0. 0001g。
水样采集
釆集水样的体积不少于1500mL。釆集的水样应置于聚乙烯容器中，用稀盐酸调节pH值至3-7之间，密封保存。水样如不能立即分析，需置于避光阴凉保存，保存时间不超过3d,若只测甲基汞，此条件下可保存7d。检测步骤
水样的制备
水样的制备分为固相萃取柱活化、水样富集和洗脱三个步骤。首先将C18固相萃取柱活化，分别用4mL的甲醇溶液和4mL的去离子水清洗，然后过4mL的DDTC改性液进行改性，过4mL的去离子水冲洗。将1000mL的水样以5mL/min的流速通过C18的固相萃取柱，然后用4mL去离子水冲洗柱子，再用甲醇溶液清洗。取10mL的乙酸铉、半胱氨酸、甲醇混合溶液以1mL/min的流速，对SPE小柱进行洗脱，收集洗脱液待测定。仪器条件
液相色谱条件：反向C18柱，150mmX4.6mm,5um；流动相为乙酸铉、半胱氨酸、甲醇溶液的混合溶液；液相泵泵速：1mL/min；进样体积：100uL。原子荧光光谱仪条件：灯电流30mA；负高压270V。标准曲线的绘制
分别准确移取0.00mL、0.10mL、0.20mL、1.00mL、2.00mL浓度为5.0ug/L的混合标准使用液于5个10mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至标线，摇匀，得到浓度为0.00ug/L、0.05ug/L、0.10ug/L、0.50ug/L、1.00ug/L的低浓度系列曲线。分别准确移取0.40mL、0.80mL、1.20mL、1.60mL、2.00mL浓度为50.0ug/L的混合标准使用液于5个lOmL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至标线，摇匀，得到浓度为2.00ug/L、4.00ug/L、6.00ug/L、8.00ug/L、10.00ug/L的高浓度系列曲线。水样检测
经过富集后的水样按照设定好的仪器条件进行检测，记录保留时间和峰面积。空白实验可以用一级纯水按照水样制备步骤进行操作。最终水样的甲基汞和乙基汞的质量浓度可以按照相应公式计算得出。以上内容来源于《DB65/T 4367-2021 水质 甲基汞和乙基汞的测定 液相色谱-原子荧光光谱法》
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