地表水中联苯胺含量的检测方法

 地表水、地下水以及污水中的联苯胺检测多采用高效液相色谱法其原理是水样通过阳离子交换固相萃取柱时,联苯胺就会被吸附,这时可以用乙酸溶液将联苯胺锁定在固相萃取柱上,然后再用甲醇淋洗除去杂质,接着用氨水甲醇溶液进行洗脱,洗脱液浓缩定容后,用具有荧光检测器的高效液相色谱分离检测。根据保留时间定性,外标法定量。

检测所用试剂及仪器

实验试剂

1.盐酸:1.19g/mlo

2.冰醋酸:1.05g/ml。

3.氨水:0.91g/ml，优级纯。

4.氢氧化钠。

5.硫代硫酸钠。

6.乙酸铵:色谱纯。

7.联苯胺:99.6%。

8.甲醇:液相色谱纯。

9.乙醇。

10.乙腈:液相色谱纯。

11.盐酸溶液:1+1。

12.甲醇水溶液:1+1。

13.乙酸铵溶液:0.01mol/L。

  称取0.77g乙酸铵，用水溶解后，稀释定容至1L。

14.乙酸溶液:3+97。

  量取3ml冰醋酸和97ml水，混匀后备用。

15.氢氧化钠溶液:1mol/L。

  称取4g氢氧化钠，用水溶解后，稀释至100ml。

16.氨水甲醇溶液:5+95。

  量取5ml氨水和95ml甲醇,混匀后备用。

17.联苯胺标准贮备液:1000ug/ml。

  称取0.050g（精确到0.1mg）联苯胺于50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释定容至标线，转移至内衬聚四氟乙烯垫的螺口棕色试剂瓶中保存。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年。也可直接购买市售有证标准溶液。

18.联苯胺标准中间液:100ug/ml。

  准确移取1.00ml联苯胺标准贮备液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释定容至标线。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存1年。

19.联苯胺标准使用液I:10.0ug/ml。

  准确移取1.00ml联苯胺标准中间液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀释定容至标线。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存3个月。使用前，应放至室温并混匀。

20.联苯胺标准使用液II:1.00ug/ml。

  准确移取1.00ml联苯胺标准使用液I于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀释定容至标线。临用现配。

21.固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱，填料为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂，150mg/6ml，或其他等效萃取柱。

22.滤膜:0.45pm聚四氟乙烯滤膜。

23.氮气:纯度≥99.99%。

检测仪器设备

1.高效液相色谱仪:具荧光检测器。

2.色谱柱:填料粒径为5pm，柱长15cm，内径4.6mm的C18反相色谱柱，或其他等效色谱柱。

3.样品瓶:500ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。

4.微量注射器:10ul、50ul和100ul。

5.氮吹仪。

6.超声波清洗仪:输出功率在180W以上，工作频率为40kHz。

7.固相萃取装置。

检测水样采集

  采样前向样品瓶中加入硫代硫酸钠，每500ml样品加入40mg。采样时，应使样品充满采样瓶，不留液上空间。如果样品的pH不在6-9之间，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH至6-9。采集的样品应在4℃以下冷藏、避光保存，5d内萃取。萃取后的洗脱液在4℃以下冷藏、避光保存，4d内分析完毕。

水样的制备

1.固相萃取柱的活化

  将固相萃取柱固定在固相萃取装置上，先用5ml甲醇以约2ml/min的流速通过固相萃取柱，在填料暴露于空气之前，向柱上加5ml水，待水剩约2ml时，停止活化。

2.富集、净化与浓缩

  量取150ml水样置于250ml锥形瓶中，以约2ml/min的流速通过活化后的固相萃取柱，水样完全富集后，加入5ml乙酸溶液，待乙酸溶液完全流出后，加入8ml甲醇淋洗，待甲醇完全流出后，继续用真空泵抽吸5min。用7ml氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液收集到浓缩瓶中。然后将浓缩瓶置于氮吹仪上，在60℃浓缩至1ml，再用水定容至2.0ml，混匀后经滤膜过滤到棕色水样瓶中，待测。

3.空白试样的制备

  用实验用水代替水样，按照与试样的制备相同步骤进行空白试样的制备。

具体检测步骤

1.色谱参考条件

  流动相A：乙腈，流动相B：乙酸铵溶液；洗脱程序为等度洗脱，流动相A/流动相B=20/80（V/V），流速：1.0ml/min；柱温：40℃；激发波长：292nm，检测波长：395nm；进样体积：40.0ul。

2.建立校准曲线

  分别取适量的联苯胺标准使用液Ⅰ或联苯胺标准使用液Ⅱ，用甲醇水溶液稀释，制备至少5个浓度点的标准系列，联苯胺的质量浓度分别为2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L、50.0ug/L、100ug/L、200ug/L（此为参考浓度）。按照色谱参考条件，由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以联苯胺的质量浓度（ug/L）为横坐标，对应的色谱峰面积或峰高为纵坐标，建立校准曲线。

3.水样的测定

  被检测水样及空白试样可以按照与校准曲线的建立相同的条件进行试样的测定。

  最后定性分析也可根据水样中联苯胺化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性，可采用不同波长下的荧光强度比辅助定性，必要时用高效液相色谱-三重四极杆质谱法进行确认。而定量分析可以按照相关的公式进行计算。

以上内容来源于《HJ 1017-2019 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法》

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